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入库时间：2020-11-04(2018山东省实验中学一模)某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题。
(1)抗盐基因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是 。
(2)在构建重组质粒时,应选用 和 两种酶对目的基因和质粒进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性。
(3)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖,农杆菌中是否已含有目的基因? (填“是”或“否”)。为什么? 。
(4)愈伤组织经 形成完整植株,这一过程需要再转接到 培养基上进行培养,该过程的实质是 。
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入库时间：2020-11-04下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是( )
A.⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
B.③侵染植物细胞后,重组Ti质粒整合到④的染色体上
C.④的染色体上若含抗虫基因,则⑤就表现出抗虫性状
D.②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
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入库时间：2020-11-04下列关于蛋白质工程和基因工程的比较,不合理的是( )
A.基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质,而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造,从而制造一种新的蛋白质
B.蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的,蛋白质工程最终还是要通过基因修饰或基因合成来完成
C.当得到可以在-70 ℃条件下保存半年的干扰素后,在相关酶、氨基酸和适宜的温度、pH条件下,干扰素可以大量自我合成
D.基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的
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入库时间：2020-11-04要检测目的基因是否成功地插入了受体DNA中,需要用基因探针,基因探针是指( )
A.用于检测疾病的医疗器械
B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子
C.带有标记的蛋白质分子
D.人工合成的免疫球蛋白
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入库时间：2020-09-17获取目的基因是实施基因工程的第一步，获取的方式也多种多样。从基因文库中直接获取和利用PCR技术扩增就是两种常用的方式，回答下列问题：
（1）基因文库中cDNA文库与基因组文库相比，前者较小，原因是_________。
（2）PCR过程所依据的原理是_______________，扩增过程需要加入_______________酶。
（3）构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有________，它的作用是___________。
（4）将目的基因导入到植物细胞中有多种方法，请写出两种_________________________。
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入库时间：2020-09-16为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。
注：GUS基因表达产物经染色能从无色变成蓝色
（1）将草甘膦抗性基因作为 ，与Ti质粒用相同的 和DNA连接酶处理构建基因表达载体。
（2）用 处理农杆菌后获得感受态细胞，将其与基因表达载体混合完成转化后，在添加 的培养基中，经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。
（3）取某品种水稻的幼胚，先进行_______处理，然后接种到培养基中，水稻幼胚细胞发生___________形成愈伤组织。用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。
（4）利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5’---ATGGCT………AGGAAC---3’
3’---TACCGA………TCCTTG---5’
根据上述序列应选择引物 （填字母）进行PCR。
A.引物：5’-TACCGA-3’ B.引物：5’-GTTCCT-3’
C.引物：5’-AUGGCU-3’ D.引物：5’-ATGGCT-3’
（5）除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用GUS基因表达产物的鉴定进行图中的筛选2，以确定目的基因是否 。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的 过程，获得转基因水稻。
（6）为获得具有抗除草剂性状的转基因水稻，还需要在个体水平进行抗性测试。请你设计一个实验方案，筛选出对草甘膦具有抗性的转基因水稻。
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入库时间：2020-09-15通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。下图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5′端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述正确的是( )
A.在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、解旋酶、Taq酶等
B.第2轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因
C.引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入运载体
D.第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2
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入库时间：2020-09-14为探究M基因的功能，科研人员将克隆得到的M基因导入拟南芥植株(自交繁殖)，流程如图所示。回答下列问题：
(1)通过过程a、b，采用________________________法来获得大量的M基因，过程b中需先加热至90～95 ℃然后冷却至55～60 ℃，冷却的目的是________________________________________________________________。
(2)为获得转基因植物，采用________法侵染拟南芥的花序。基本过程如下：
①过程d：将重组质粒导入大肠杆菌，其目的是________________。
②过程e：将重组质粒导入农杆菌，再将含有重组质粒的农杆菌离心、富集，得到含有M基因的农杆菌液。
③过程f：在拟南芥植株产生大量花序时，将其花表面部分在农杆菌悬浮液中浸泡20～30 s，3～4周后得到转化拟南芥植株的种子(T0)。浸泡之前，需先剪去已经长成的角果(这些角果将来可发育成种子)，原因是
________________________________________________________________。
④将收获的拟南芥T0种子，播种在含有________的培养基上，能健康生长的幼苗含有________________。
(3)采用农杆菌花序侵染的方法转化，一般只能将目标片段整合到一条DNA上。若要获得M基因稳定的突变体，需________筛选出能稳定遗传的突变体。
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入库时间：2020-09-07为了有效控制水稻害虫的危害，中国农业科学院和华中农业大学合作，成功地获得了转Bt基因的二倍体水稻。该基因来源于苏云金芽孢杆菌，基因的表达产物Bt毒蛋白具有良好的杀虫效果。请回答：
（1）若知道Bt毒蛋白的氨基酸序列，则可以推测出Bt基因的核苷酸序列，但推测出的核苷酸序列并不是唯一的，其原因是 。在已知Bt基因的核苷酸序列之后，再通过 方法获取目的基因。
（2）获得Bt基因后，在体外可以通过 技术进行扩增，该技术需要的条件是 、酶、dNTP、模板，其中的酶是 。然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具的基因、启动子和终止子之外，还需具有 。
（3）将Bt基因导入水稻细胞中时不宜采用农杆菌转化法，最可能的原因是 。
（4）可采用抗虫接种实验的方法，在 水平上鉴定Bt基因在受体植株内是否成功表达。
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入库时间：2020-09-03P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与甲图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌中获得基因工程菌。甲图中mel基因表达能使白色菌落变成黑色，aacCI是庆大霉素（抗生素）抗性基因。甲图中箭头位置是不同限制酶的切割位点，乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题：
(l)甲图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的_____________酶代替，原因是________________。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）在__________酶的作用下形成重组质粒。
(2)经测定图甲质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，据此推测，目的基因的长度应为__________kb。基因表达载体中必须含有启动子，它的作用是__________________。
(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种_____________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需要接种到含有________的固体培养基上，选择颜色为_____________的菌落扩大培养，进而筛选出所需的工程菌。
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入库时间：2020-09-03苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白（Bt）与豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）杀虫机理不同。在转Bt基因作物种植区，发现棉铃虫种群抗性基因频率显著上升。科学家尝试用转双基因烟草对2龄幼虫进行多代抗性筛选。以下叙述错误的是
A. 利用DNA分子杂交技术不能检测烟草植株的抗虫性状
B. 单基因抗性筛选与双基因抗性筛选导致棉铃虫种群基因库不同
C. 种植转双基因烟草可避免棉铃虫产生抗性基因
D. 转基因植物的培育和种植应考虑可能造成的生态风险
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入库时间：2020-09-022018年7月，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝-百白破(rHB-DTP)四联疫苗，经各项检测均通过rHB-DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答下列问题：
(1)为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应________，在逆转录酶的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____________(填“相同”或“不同”)。
(2)由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用______，然后通过_____大量扩增，此技术的前提是已知一段目的基因的核苷酸序列以便合成引物。
(3)把目的基因导受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由________________________。(写出2点)
(4)研究发现，如果将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_________________。
(5)实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的______数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是______，免疫预防作用更强。
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入库时间：2020-09-01（百校联盟2020届高考全程精炼全国II卷理综试题）
大肠杆菌在基因工程的产生和发展占据了十分重要的地位。回答下列问题：
(1) 从大肠杆菌的R型菌株分离出来的第一个限制酶为__________，它能识别“回文序列
”，并在 G和A之间切开，形成的粘性末端是______________________（写出具体种类）。
(2) 许多基因工程载体都是由来自大肠杆菌中的_________改造成。 E . coli DNA 连接酶是从大肠杆菌中分离得到的，另一类是从T4噬菌体中分离得到的T4DNA连接酶，这两类连接酶作用底物方面的主要差别是__________。
(3)早期基因工程常以大肠杆菌作为受体细胞，这是因为大肠杆菌具有__________________的特点（至少答出两点）。大肠杆菌最常用的转化方法是：首先用_________处理细胞，使细胞处于一种能够吸收周围环境中DNA分子的状态，第二步是将重组DNA溶于缓冲液中并与感受态细胞混合，在一定温度下促进_________。
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入库时间：2020-09-01R7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列(3′UTR)结合，进而影响基因的表达。为研究R7是否影响家蚕基因B(调控家蚕眼睛发育)的表达，科研人员将基因B中对应3′UTR的DNA片段与荧光素酶基因(R7不影响荧光素酶基因的表达)重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果。请回答下列问题：
（1）利用________技术扩增基因B中对应3′UTR的DNA片段，应先依据___________合成引物。若对一个含基因B的DNA扩增n代，则共需消耗________对引物。
（2）图甲中对应3′UTR的DNA片段应插入到位点__________，原因是___________。重组载体中的荧光素酶基因在基因工程中作为________。
（3）科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取蛋白质，经处理检测后获得相对荧光值(在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光)，其结果如图乙所示。
①实验组为将重组载体导入含R7的家蚕胚胎细胞中，对照组1的处理为将含有荧光素酶基因的表达载体(不含对应3′UTR的DNA片段)导入含R7的家蚕胚胎细胞中，则对照组2的处理应为________________________________________________。
②依据实验结果可推知，R7影响基因B的表达，即通过遵循________________原则，R7与基因B所转录的mRNA的3′UTR结合，进而________(填“促进”或“抑制”)基因B的表达。
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入库时间：2020-08-31（湖南省2019-2020学年高三模拟检测生物试卷）
胰岛素是治疗胰岛素依赖糖尿病的特效药物，但是天然胰岛素在人体内的寿命具有几个小时，通过蛋白质工程改变胰岛素的空间结构，以延长岛素的半衰期，可以得到长效胰岛素。如图是用蛋白质工程设计长效胰岛素的生产过程：
（1）基因工程中限制酶切割后的运载体与目的基因能再次拼接的理由 。
（2）在基因工程中获取目的基因的方法除图中方法，还有利用PCR技术扩增和 。
（3）上述基因工程中除质粒外， 也可作为运载体。
（4）构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新的胰岛素模型的主要依据是 。
（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大旸杆菌作为受体细胞，原因是 。
（6）新的岛素为什么还要加工、修饰？ 。
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入库时间：2020-08-31HIV(艾滋病病毒)为逆转录病毒，而逆转录酶缺乏校正修复功能，因由HIV的变异频率作常高。因此，研制安全、有效的疫苗是控制HIV传播的重要手段之一。请根据相关知识回答下列问题：
(1)科学工作者利用转基因技术研制HIV疫苗取得了一定进展，下图是该技术的操作简要路径(①②③表示操作步骤)：图中②表示__________，目的基因的载体有________(答出三种)，要检测目的基因是否插入酵母菌的DNA，可采用______技术，利用探针检测酵母菌的基因，如果出现_____________，就表明目的基因己插入酵母菌DNA中。
(2)在基因工程中将重组质粒导入不同的受体细胞可采用不同的方法，导入动物细胞若，一般采用 ，导入植物细胞，采用最多的方法是 ，若是导入大肠杆菌，一般情况下，需要制备感受态细胞，原因是 。
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入库时间：2020-08-28乙型肝炎病毒（HBV）可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系，图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白流程图。回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增图1中HBx基因时，在第______次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键______（填“相同”或“不相同”）。
（2）基因表达载体导入受精卵常用______法，检测HBx基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与相应
物质杂交。
（3）④过程体外受精前需要对精子进行______处理，卵母细胞需要发育到______期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过______处理的受体仓鼠子宫内。
（4）在⑤步聚操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因插入而死亡外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是______。
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入库时间：2020-08-27矮牵牛花瓣紫色的深浅由花青素的含量高低决定，花青素由查耳酮合酶(CHS)催化合成。为获得紫色更深的矮牵牛，科研人员将CHS基因导入野化合成。为获得紫色更深的矮牵牛，科研人员将CHS基因导入野生型紫花矮牵牛叶肉细胞中，得到的转基因植株花色反而出现了浅紫色。检测CHS基因的转录水平，得到左图所示电泳图谱(2道和3道分别表示野生型和转基因植株)。下列判断正确的是
A.用不同的限制酶处理含CHS基因的DNA和运载体
B.转基因植株中内源CHS基因的转录水平明显低于野生型
C.转基因植株内外源CHS基因的转录均被抑制
D.没有获得紫色更深的植株是因为CHS基因没有成功转入
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入库时间：2020-08-26水稻是自花授粉作物，杂交水稻育种成功得益于对雄性不育性状的利用，育种工作者就某水稻品系中发现的雄性不育基因开展了下面的一系列研究。
（1）水稻在抽穗期，幼穗中的雄蕊进行减数分裂产生花粉，此期间水稻对温度敏感。温敏雄性不育系 S2 表现为高温条件下（≥25℃）雄性不育，此雄性不育性状由 RNZ 基因控制。为了研究高温对 RNZ 基因表达的影响，研究人员选取长势基本一致的 S2 植株， 均分为两组分别在低温、高温条件下进行处理，请根据后续实验过程分析：
①检测RNZ基因的表达情况。请依据所学知识，写出以基因转录相对数量为指标，检测 S2 叶片和幼穗 RNZ 基因表达情况的基本程序 。
②实验记录数据如右图。与 S2 叶片中 RNZ 基因表达情况比较，温度变化对 S2 幼穗中 RNZ 基因表达的影响是 。
（2）已知 RNZ 基因编码的核糖核酸酶在生物体各组织细胞中广泛存在，催化 tRNA 的加工。依据上述实验结果，研究人员猜测，由于叶片光合速率不同于幼穗，RNZ 编码产物可能也分布于叶绿体中。为验证此推测，研究人员做了如下实验：
①构建 RNZ-GFP 融合基因表达载体（GFP 为绿色荧光蛋白基因）。此表达载体除具有融合基因、启动子、终止子外，还应具有 。
②将表达载体导入 中，然后通过 技术获得转入 RNZ-GFP 融合基因的水稻。
③实验者将转基因植物细胞置于适宜的波长光谱的激发下（该操作会使叶绿体会发出红色荧光），观察到 ，证明 RNZ 蛋白定位在叶绿体中。
④本实验还应补充一组 作为对照，若结果为 能支持③的结论成立。
（3）根据以上研究成果，为了最终揭示温敏雄性不育的机制，请写出接下来可以进一步研究的问题。（写出 1 个即可） 。
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入库时间：2020-08-25现代生物技术在医药领域有广泛应用。将人体中B蛋白基因导入大肠杆菌，以生产药物B蛋白。回答下列问题：
（1）将B蛋白基因导入大肠杆菌，不能直接从人类基因文库中获取B蛋白基因，原因是 。
（2）为获取B蛋白基因，需要在人体细胞内提取的 经逆转录形成cDNA，cDNA中_______（填“含有”或“不含”）内含子序列。利用PCR技术扩增目的基因时，a和b表示两种引物，这两种引物的碱基序列不能互补，原因是 。
（3）导入过程所用载体pUC19质粒如图所示，LacZ基因表达产物能水解X-gal，使菌落呈蓝色，不能水解X-gal的菌落呈白色。已知三种限制性核酸内切酶X、Y、Z所识别的序列分别是C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC（↓表示剪切点）。为便于筛选导入重组质粒的大肠杆菌，应选用__________酶将该质粒与目的基因构建为重组质粒，并且在培养基中加入________，接种培养后选择________色菌落。
（4）筛选得到成功导入B蛋白基因的大肠杆菌菌株，为检验B蛋白基因是否表达，可以用含放射性标记的B蛋白基因单链作为探针，检测受体菌有无__________。