人类疾病的转基因生物模型常用于治病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠(2N)制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示(注:基因B为高血压相关基因)。
(1)进行①过程的卵母细胞已经处于___________期,此时细胞中含__________个染色体组。受精过程中,防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和__________。
(2)从人体细胞中获取基因B后,可以采用PCR的方法进行扩增,其原因是____________,PCR扩增目的基因的前提是要有一段____________序列,以便根据这一序列合成引物。
(3)②过程所采用的技术叫做___________法。将早期胚胎移植到代孕鼠体内时,代孕鼠对移入子宫的重组胚胎基本上不发生________________,这为重组胚胎在代孕母鼠体内的存活提供了可能。
(4)要在分子水平上检测成功导入的B基因在大鼠中是否成功表达,可采用________________________法。
减数第二次分裂中期(MII 中期 1 卵黄膜封闭作用 DNA半保留复制 已知目的基因的核苷酸 显微注射 免疫排斥反应 抗原—抗体杂交
【解析】
试题分析:本题主要考查现代生物科技专题方面的知识,重要从理解教材的角度出题,注重对课本知识的巩固。能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系,形成知识的网络结构。
解析:
(1)进行①过程的卵母细胞已经处于减数第二次分裂中期(MII 中期)期,此时细胞中含1个染色体组。受精过程中,防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵黄膜封闭作用。
(2)从人体细胞中获取基因B后,可以采用PCR的方法进行扩增,其原因是DNA半保留复制,PCR扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。
(3)②过程所采用的技术叫做显微注射法。将早期胚胎移植到代孕鼠体内时,代孕鼠对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为重组胚胎在代孕母鼠体内的存活提供了可能。
(4)要在分子水平上检测成功导入的B基因在大鼠中是否成功表达,可采用法抗原—抗体杂交。
过程 | 说明 | 图解 |
变性 | 当温度上升到90℃以上时,双链DNA解聚为单链 | |
复性 | 温度下降到50℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 | |
延伸 | 72℃左右时,TaqDNA聚合酶有最大活性,可使DNA新链由5'端向3'端延伸 |
细胞内DNA复制 | 体外DNA扩增(PCR) | ||
不同点 | 解旋 | 在解旋酶作用下边解旋边复制 | 80~100℃高温解旋,双链完全分开 |
酶 | DNA解旋酶、DNA聚合酶 | TaqDNA聚合酶 | |
引物 | RNA | DNA、RNA | |
温度 | 体内温和条件 | 高温 | |
相同点 | ①需提供DNA模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③子链延伸的方向都是从5'端到3'端 |
项目 | 说明 | |
原理 | DNA在260nm的紫外线波段有一强烈吸收峰,峰值大小与DNA的含量是正相关 | |
过程 | 稀释 | 2μLPCR反应液,加入98μL蒸馏水,即将样品进行50倍稀释 |
对照调零 | 以蒸馏水作为空白对照,在波长260nm处,将紫外分光光度计的赌注调节至零 | |
测量 | 取DNA稀释液100μL至比色杯中,测定260nm处的光吸收值 | |
计算 | DNA含量(μg/mL)=50×(260nm的读数)×稀释倍数 |
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